4-Nitrofenil beta-D-galattopiranoside CAS:200422-18-0

Effetto: ONPG è un substrato utilizzato specificamente per rilevare la presenza e l'attività dell'enzima β-galattosidasi. Quando l'enzima β-galattosidasi è presente e attivo, scinde ONPG in due prodotti: o-nitrofenolo e un derivato del galattosio. Il rilascio di o-nitrofenolo provoca un cambiamento di colore in giallo, che può essere misurato mediante spettrofotometro.

Applicazioni: ONPG ha diverse applicazioni nella ricerca in biologia molecolare e biochimica:

Determinazione dell'attività della β-galattosidasi: l'ONPG è comunemente utilizzato per misurare e quantificare l'attività dell'enzima β-galattosidasi. La velocità di formazione dell'o-nitrofenolo, che è direttamente proporzionale all'attività enzimatica, può essere misurata spettrofotometricamente.

Espressione e regolazione genica: ONPG è spesso utilizzato in esperimenti relativi allo studio dell'espressione e della regolazione genica. Viene frequentemente impiegato in saggi con proteine ​​di fusione, come il sistema di fusione lacZ, comunemente utilizzato, per studiare l'espressione di geni sotto il controllo di promotori specifici. L'attività della beta-galattosidasi misurata tramite ONPG fornisce informazioni sul livello di espressione genica.

Screening per l'attività della β-galattosidasi: ONPG può essere utilizzato come metodo di screening colorimetrico nella tecnologia del DNA ricombinante per identificare la presenza e la funzionalità del gene LacZ, che codifica per la β-galattosidasi. Questo metodo di screening aiuta a identificare i cloni che contengono il gene di interesse.

Studi di cinetica enzimatica: ONPG è utile anche per studiare la cinetica dell'enzima β-galattosidasi. Misurando la velocità della reazione enzima-substrato a diverse concentrazioni di substrato, è possibile determinare parametri cinetici come le costanti di Michaelis-Menten (Km) e le velocità massime di reazione (Vmax).