4-nitrofenil beta-D-galattopiranoside CAS:200422-18-0

Effetto: ONPG è un substrato utilizzato specificatamente per rilevare la presenza e l'attività dell'enzima β-galattosidasi.Quando l'enzima β-galattosidasi è presente e attivo, scinde l'ONPG in due prodotti: o-nitrofenolo e un derivato del galattosio.La liberazione di o-nitrofenolo provoca un cambiamento di colore giallo, che può essere misurato utilizzando uno spettrofotometro.

Applicazione: ONPG ha diverse applicazioni nella ricerca di biologia molecolare e biochimica:

Determinazione dell'attività della β-galattosidasi: l'ONPG è comunemente utilizzato per misurare e quantificare l'attività dell'enzima β-galattosidasi.La velocità di formazione dell'o-nitrofenolo, che è direttamente proporzionale all'attività enzimatica, può essere misurata spettrofotometricamente.

Espressione e regolazione genica: l'ONPG è spesso utilizzato in esperimenti relativi agli studi sull'espressione e sulla regolazione genica.Viene spesso utilizzato nei test sulle proteine ​​di fusione, come il sistema di fusione lacZ comunemente utilizzato, per studiare l'espressione dei geni sotto il controllo di promotori specifici.L'attività della beta-galattosidasi misurata utilizzando ONPG fornisce informazioni sul livello di espressione genica.

Screening dell'attività della β-galattosidasi: l'ONPG può essere utilizzato come metodo di screening colorimetrico nella tecnologia del DNA ricombinante per identificare la presenza e la funzionalità del gene LacZ, che codifica per la β-galattosidasi.Questo metodo di screening aiuta a identificare i cloni che contengono il gene di interesse.

Studi sulla cinetica degli enzimi: l'ONPG è utile anche per studiare la cinetica dell'enzima β-galattosidasi.Misurando la velocità della reazione enzima-substrato a diverse concentrazioni di substrato, è possibile determinare parametri cinetici come le costanti di Michaelis-Menten (Km) e le velocità massime di reazione (Vmax).